Welcome to...
Department of Biology, Faculty of Science
Mahidol University
Wisdom of the Land

Home
About us
News and Events
Research
Facilities
Publications
Awards
Curriculums
eLearning
Staff
Alumni
Service
Shop
Webboard
Download
Contact us
New Homepage
Home | Faculty of Science | Mahidol University | FAQs | Members | ภาษาไทย

Department of Biology Webboard
Search:
[Reload] [Recent] [Post] [Reply]
Molecular techniques

Detail: 1. อยากถามอาจารย์ว่าผลการทดลองจากการทำ PCR ต่างจาก southern blot อย่างไร ทำไมการวิจัยโดยทั่วไปถึงใช้ 2 เทคนิคนี้ควบคู่กัน หรือว่าเป็นเพราะ DNA มีปริมาณน้อย จึงต้องนำมาทำ PCR ก่อนที่จะทำ southern blot
2. ปฏิกิริยา PCR ในเครื่อง thermocycler จำเป็นต้องมีเอนไซม์ telomerase ไหมครับ ? ผมสงสัยว่าเวลามันเกิด DNA replication สาย DNA สายใหม่ที่จำลองจาก Lagging strand ของสายเดิมมันจะไม่สั้นลงไปเรื่อยๆ ในทุกๆ cycle หรอครับ? และในกระบวนการนี้มี proof reading ไหมครับ?

By: CTK U4905XXX January 24, 2008 14:47

Message 1:
ช่วยตอบครับ

1) ในการทำ Southern blot มี probe ตรวจสอบว่า PCR products เราตรงตามที่ต้องการหรือไม่

2) ไม่มี telomerase ครับ ใน PCR ไม่มี lagging strand ครับ เพราะเป็นการจำลอง DNA ช่วงสั้นๆ ดังนั้นก็ไม่สั้นลง ยกเว้นจะมีความแปรผันในขนาดของ PCR product ที่อาจเกิดขึ้นได้ และไม่มี proof reading ครับ

By: Webmaster January 25, 2008 06:46

Message 2:
สวัสดีค่ะ รบกวนเรียนขอคำแนะนำค่ะ อาจารย์

หนูกำลังทำโปรเจคเกี่ยวกับไวรัสพืช ซึ่งตอนนี้กำลังศึกษาถึงขั้นตอน PCR และได้พบปัญหาคือ หลังจาก ทำPCR แล้ว ได้bandที่เข้ม ชัด และขนาดตามต้องการ แต่เมื่อนำ PCR Product มาทำPCR อีกครั้งเพื่อตรวจสอบและเพิ่มปริมาณให้มากกว่าเดิม ผลเป็น Sear band ซึ่งไม่ได้bandดังเช่นทำPCRครั้งแรก หนูจึงอยากจะทราบสาเหตุท่ี่ทำไห้เกิด Sear band และควรแก้ปัญหาตรงนี้ยังไงค่ะ

ขอบพระคุณมากค่ะ



By: กุ๊กกิีก April 29, 2010 02:05

Message 3:
ผมก็พบด้วยตัวเองเช่นเดียวกันหลายครั้ง (ไม่ได้เกิดทุกครั้ง) และไม่แน่ใจว่าเกิดจากสาเหตุใด ส่วนตัวคาดว่าเกิดจากการที่ template มีความเข้มข้นสูงไป (ลองเจือจาง template ดู) แต่บางกรณีก็แก้ไม่ค่อยหาย ซึ่งอาจเกิดจาก sequence ของ template มีที่ให้ anneal หลายที่ก็ได้

...in my opinion ครับ


By: เมธา April 29, 2010 21:09

Message 4:
แบบนี้อาจใช้ Hot start PCR???


ʎǝllɐɥʎǝllɐɥ (Lv 66)
Webboard Novice
Exp: 5729



By: ʎǝllɐɥ April 29, 2010 21:45

Message 5:
เอิ่ม ผม CTK คนแรก จะมาขอตอบคำถามของ CTK อีกคนที่ถามไว้ดังนี้นะครับ


1. ใช้คู่กัน เพราะ เราจะต้องทำ PCR เพื่อเพิ่มจำนวน DNA ทีี่่เราสนใจให้มีปริมาณมากก่อน แล้วจึงนำมาทำ Southern blotting เพราะการที่มี DNA จำนวนมากก็จะทำให้ sense ในการตรวจสอบติดตามโดย DNA probe นั้นดีขึ้น อีกอย่างที่ทำ PCR ก่อน เพราะเราจะได้แบ่งชิ้น DNA จำนวนหนึ่งมาตรวจสอบคร่าวๆได้ก่อนว่าชิ้น DNA ที่เราสนใจมีขนาดประมาณกี่ bp ตรงกับที่เราต้องการหรือไม่


2. ที่เราไม่ต้องใช้ enz.telomerase เพราะ primer ที่ใช้ในปฏิกิริยา PCR นั้นเป็น DNA primer ไม่ใช่ RNA primer เหมือนกระบวนการ DNA replication จริงๆในร่างกาย ดังนั้นในท้ายสุดจึงไม่มีความจำเป็นจะต้อง remove เอาชิ้น primer ออก สายจึงไม่สั้นลง

เพิ่มเติมอีกนิดว่า DNA polymerase ที่ใช้ใน ปฏิกิริยา PCR นั้นส่วนใหญ่ซื้อมาจากบริษัท ซึ่งถ้าราคาแพง เอนไซม์นั้นก็จะมีคุณสมบัติ proofreading ด้วย ถ้าราคาถูกก็จะไม่มี


ป.ล. โดนยืมนามปากกามาใช้เฉยเลย ฮ่าๆๆ


By: CTK April 30, 2010 19:28

Message 6:
จริงๆเป็นมุขนะคับ


คือผมถามเอง ตอบเอง


By: CTK April 30, 2010 19:33

[Back to top...]
Post Reply to this Topic
 
Reply:
PIN: (โปรดพิมพ์เลขหนึ่งสามตัวในช่องว่างนี้)
Name:
Email:
 
 
Special Tags:

Bold = [b]Bold[/b]

Gallus gallus domesticus = [i]Gallus gallus domesticus[/i]

WARNING! = [font color=#FF0000]WARNING![/font]

http://www.sc.mahidol.ac.th/scbi = [url]http://www.sc.mahidol.ac.th/scbi[/url]

scnop@mahidol.ac.th = [email]scnop@mahidol.ac.th[/email]

= //Angry

= //Grin

= //Kidding

= //Laugh

= //Sad

= //Wow

= //Smile

= //Cool

= //Huh

= :-D

Insert picture [img]http://www.somewhere.com/somefile.jpg[/img]

Department of Biology, Faculty of Science, Mahidol University
Rama VI Road, Rachadhavi, Bangkok 10400 Thailand

Tel. (+66) 2201-5250 Fax. (+66) 2354-7161
Webmaster: scnop@mahidol.ac.th